2D-DIGE分析（二维差异凝胶电泳分析）结合了传统的二维电泳和荧光标记技术，能够在单个凝胶中分辨并定量多种蛋白质样本。2D - DIGE（Two - Dimensional Difference Gel Electrophoresis）的核心优势在于其高分辨率和高灵敏度，用于比较蛋白质表达谱的差异。它基于传统的双向电泳（2 - DE），但在荧光标记方面进行了创新。在 2D - DIGE 中，不同的蛋白质样品（通常是实验组和对照组）在电泳前使用不同的荧光染料进行标记，这些荧光染料包括 Cy2、Cy3 和 Cy5，它们具有不同的激发和发射波长。标记后的样品混合在一起进行双向电泳，由于不同染料标记的蛋白质在同一凝胶上进行分离，这样可以减少实验误差，因为在同一块凝胶上进行比较，避免了传统 2 - DE 中不同凝胶之间由于电泳条件等因素导致的差异。例如，Cy3 标记的样品可能来自疾病组，Cy5 标记的样品来自健康组，它们在相同的凝胶环境中被分离，更有利于准确地比较两组蛋白质的差异。通过对蛋白质样本进行荧光染料标记，不同样本可以同时在同一凝胶中分开运行，减少了实验误差，提高了数据的可重复性。

一、实验步骤

1、样本制备

在2D-DIGE分析中，样本必须经过精确的定量和处理，以确保在电泳过程中获得最佳的分辨率和重现性。样本中盐分和其他离子的去除是必要的，以避免对电泳的干扰。

2、荧光染料标记

2D-DIGE依赖于荧光染料对蛋白质的标记，常用的染料包括Cy2、Cy3和Cy5。每种染料与不同的样本结合，通过不同的激发波长进行识别。必须确保荧光染料与蛋白质的结合反应完全和特异，以避免染料不均匀或非特异性结合造成的误差。

3、等电聚焦

样本经过标记后，在第一维上通过等电聚焦分开。蛋白质在pH梯度中迁移，直至其等电点，此过程需要精确控制温度和电压，以获得最佳的分辨率。

4、SDS-PAGE

在第二维中，蛋白质根据其分子量通过SDS-PAGE进一步分离。胶的质量和电泳时间需要经过优化，以确保蛋白质带的清晰度。

5、图像采集与分析

电泳完成后，通过扫描仪获取荧光图像。然后使用专门的软件进行图像分析，以定量比较不同样本中的蛋白质表达水平。这一过程对分析软件的准确性和使用者的经验提出了很高的要求。

6、数据统计与解释

数据分析通常需要借助多种统计工具，以确定差异表达的蛋白质，并进一步通过生物信息学手段进行蛋白质识别和功能分析。

二、2D-DIGE分析的技术优势

1、高灵敏度和高分辨率

2D-DIGE分析能够在同一凝胶中同时比较多个样本，大大提高了实验的灵敏度和分辨率。

2、减少变异和提高数据可靠性

由于不同样本在同一凝胶中运行，实验间的技术变异被显著降低，数据的可靠性和重复性大大增强。

3、适用于复杂样本分析

2D-DIGE分析特别适用于复杂生物样本的研究，如组织样本和细胞裂解物。

三、应用领域

1、疾病研究

在疾病的诊断和发病机制研究中发挥作用。例如，通过比较疾病患者和健康人的生物样品（如血清、组织等）的蛋白质组差异，寻找疾病相关的标志物，这些标志物可能成为疾病诊断的新靶点或者用于疾病预后的评估。

2、药物研发

用于研究药物作用机制和药物疗效评估。可以比较药物处理前后细胞或组织的蛋白质组变化，发现药物作用的靶点蛋白和相关的信号通路，从而为药物的研发和优化提供依据。

3、植物学和微生物学研究

在研究植物对环境胁迫的响应、微生物的生理功能变化等方面也有广泛的应用。例如，研究植物在干旱、盐碱等环境胁迫下蛋白质组的变化，或者微生物在不同营养条件下蛋白质组的变化等。

在蛋白质组学研究的前沿，百泰派克生物科技为客户提供高质量的2D-DIGE分析服务。我们的专业团队和丰富经验确保每个项目的成功实施，从样本制备到数据分析，我们力求在每个环节为客户提供最佳支持，欢迎随时咨询。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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